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更新時間：2023-11-13
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轉染是將外源性核酸（DNA或RNA）采用各種化學、生物學或物理方法導入細胞，從而實現(xiàn)對細胞基因功能的蛋白質(zhì)表達研究。生成重組蛋白，或特異性地增強或抑制轉染細胞中的基因表達是轉染實驗的主要目的。因此，轉染是一種功能強大的分析工具，可用于基因或基因產(chǎn)物的功能和調(diào)控研究，用于生成轉基因生物，并可用作基因治療方法。常規(guī)的轉染技術主要分為瞬時轉染和穩(wěn)定轉染，怎么選擇瞬時轉染和穩(wěn)定轉染呢？
選擇瞬時轉染還是穩(wěn)定轉染，具體取決于您要開展的實驗的時間范圍和最終目標。瞬時轉染細胞一般在轉染后24-96小時收集，常用于研究基因或基因產(chǎn)物的短期表達效應，執(zhí)行RNA干擾（RNAi）介導的基因沉默，或快速生成小量重組蛋白。相比之下，當需要長期基因表達或轉染細胞需在多項實驗中使用時，則更多地選擇穩(wěn)定轉染。由于將DNA載體整合至染色體中的概率較低，細胞的穩(wěn)定轉染更麻煩、更具挑戰(zhàn)性，需要選擇性篩選和克隆分離。因此，穩(wěn)定轉染通常用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn)、長期藥理學研究、基因治療或長期基因調(diào)控機制研究。
瞬時轉染 | 穩(wěn)定轉染 |
外源基因保留在細胞核內(nèi)，不整合到基因組中 | 外源基因整合到基因組中 |
外源基因不傳給子代，遺傳改變是暫時的 | 外源基因代代相傳，遺傳改變是長久的 |
瞬轉的質(zhì)粒不需要帶有抗性 | 穩(wěn)轉質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便選擇性篩選出穩(wěn)轉克隆株 |
DNA、RNA都可用于瞬轉 | 只有 DNA可用于穩(wěn)轉，RNA 本身不能穩(wěn)定導入細胞 |
操作簡單，構好質(zhì)粒經(jīng)細胞復蘇、轉染、細胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白 | 需先將構好的質(zhì)粒線性化，再導入細胞，經(jīng)過篩選、細胞傳代等步驟才能得到穩(wěn)轉細胞系 |
周期短，快速產(chǎn)生高表達目的蛋白 | 周期長，需要 2~3 周篩選穩(wěn)轉株，蛋白表達水平低 |
無法長期生產(chǎn)得到重組蛋白 | 能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白 |
實驗成本低 | 實驗成本高，得到穩(wěn)轉株后再生產(chǎn)蛋白成本大大降低 |
本期內(nèi)容：怎么選擇瞬時轉染和穩(wěn)定轉染呢？
下期內(nèi)容：ELISA實驗的具體步驟
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